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ELISA包被

发布时间: 2022-01-14  点击次数: 218次

ELISA包被时我们通常使用PH9.6的缓冲液的原因是什么呀,为什么不用中性或酸性的包被液呢。

包被缓冲液的选择要依靠你所包被的物质而定,没有绝对的选择,但有一个原则就是要尽可能的保持包被物的活性不被损失.目前常用的包被缓冲液有PBS,CBS,tris盐缓冲液,咪脞缓冲液等,一般来说,缓冲液的pH要大于蛋白质的pI,以保持其活性.

碱性包被液如碳缓用的较多,尤其是在小分子和载体蛋白的偶联物的包被,其主要的优势在于碱性环境可以使蛋白更容易的与板子结合。
也有用PBS和柠檬酸缓的,但是比较少见,
碳缓效果很好,又易于配置,所以CC用的最多啊!

为什么缓冲液的PH大于蛋白的PI包被效果好呢,跟蛋白的带电荷情况有没有关系,

蛋白和聚苯乙烯板子结合的详细过程目前上不是很明了,目前认为是通过静电吸附在板子上的,而聚苯乙烯板子一般在出厂前也要经过强电厂处理以提高吸附能力!肯定和蛋白的带电情况有关,包被缓冲液并不一定都是PH9.6 的CB,不同的蛋白选用不同的包被缓冲液可以得最佳的包被效果,从上面可以看出和蛋白的带电情况有明显的相关性!

为什么缓冲液的PH要大于包被蛋白的PI,原因有两点:
一是因为蛋白质与酶标板的结合主要是靠疏水作用的物理吸附。而缓冲液的PH略大于包被蛋白的PI,有利于蛋白质疏水键的适当暴露。二是因为酶标板聚苯乙烯表面暴露的主要是C-H键,而缓冲液的PH略大于包被蛋白的PI,可以使蛋白质带上负电荷,有利于蛋白质与酶标板的牢固结合,提高包被效率。所以我们常用的包被液体多位PH9.6的碳酸氢钠缓冲液,当然对PI低的蛋白质也有使用PH7.4的包被液的情况。
(蛋白质等电点的英文缩写是PI。   蛋白质在溶液中有两性电离现象。假设某一溶液中含有一种蛋白质。当PI=PH时该蛋白质极性基团解离的正负离子数相等,净电荷为0,此时的该溶液的是PH值是该蛋白质的PI值。某一蛋白质的PI大小是特定的,与该蛋白质结构有关,而与环境PH无关。  在某一PH溶液中当PH>PI时该蛋白质带负电荷。反之PH<PI时该蛋白质带正电荷。PH=PI时该蛋白质不带电荷  人体内PH=7.4;而体内大部分蛋白质的 PI<6; 所以人体内大部分蛋白质带负电荷)


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