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试剂盒实验异常,可想过是什么原因

发布时间: 2022-01-17  点击次数: 191次

在使用试剂盒做实验的时候,有些细节若是做不好会出现实验异常,或者效果不佳,那么你有想过是什么原因吗?
·白板异常:显色步骤结束后,酶标板所有孔均无颜色。阳性对照不显色。
  这可能是因为:
 1. 试剂已过效期,或不同试剂盒组分混用(解决方式:检查试剂的组分及批号,确认未过期以及所有组分均属对应的试剂盒。不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用)。
 2. 错加、漏加试剂底物、显色剂 A或B(解决方式:严格按说明书的步骤操作,加完试剂后可观察一下液面高度是否一致,以减少漏加现象)。
 3. 洗板及加样过程中,酶标受污染失活失去催化显色剂显色的能力(解决方式:确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如叠氮钠等,确认配制洗液的容器已洗干净)。
 4. 终止液误作洗涤液稀释或当底物缓冲液配制(解决方式:每次配制时都应看清标签标明物质)。
 5. 蒸馏水有问题(解决方式:确认配制洗液的纯化水达到要求且未污染,与好蒸馏水比较)。
    



·显色弱、灵敏度低:实验结束后,包括阳性对照、质控在内的所有板孔颜色均较淡。 
  这可能是因为:试剂盒超过期, 超过有效期的产品可能会产生很弱的信号;试剂盒没有按规定进行保存,受高温影响(实验前检查试剂的组分及批号,确认试剂未过期。不要将试剂盒长时间置于常温下,按使用规定储藏)。

 1. 试剂、样品用前未平衡至室温。如何解决?从低温冰箱中取出的试剂及样品应置室温平衡 20分钟左右。
 2. 加入试剂的体积和时间有误,移液器计量不准,吸嘴内水分太多或不清洁。如何解决?确定所使用的试剂体积正确,加入时间适当。 校正移液器,移液器与吸嘴配合要紧密吻合。移液不宜太快,排放应完全。
 3. 洗板及加样过程中,酶标受污染失活而失去催化显色剂显色的能力。如何解决?确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如叠氮钠等,确认配制洗液的容器已洗干净,确认配制洗液的纯化水达到要求且未受污染。
 4. 孵育时间及孵育温度未达到要求 ,反应板放入培养箱时注意温度并及时调整。如何解决?孵育温度应控制在 37-38℃,孵育时间严格按照说明书操作。 保温期内不宜多开门,以免影响保温。
 5. 洗板次数过多,或浓缩洗液稀释倍数不符合要求;洗涤冲击力太大。浸泡时间太长。如何解决?严格按说明书要求稀释浓缩洗液及洗板,减小洗涤冲击力,按说明书要求置留洗涤液时间和洗涤次数。
 6. 显色剂加量不足或顺序颠倒,或混合后加入。如何解决?显色剂滴瓶垂直向下,持力均匀,滴速不宜过快,先加显色剂 A,后加显色剂B,不可将A、B液混合后加入
 7. 底物作用时间不够。如何解决?准确定时。
 8. 蒸馏水水质有问题。如何解决?测定蒸馏水配制试剂对酶免疫法的影响。
    

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·实验结束后,阴阳性对照正常,质控正常,但临床标本感觉显色较弱 
1. 待测标本中可能不含强阳性标本,故结果可能是正常的(解决方式:如有怀疑,可复检)。
2. 标本加入叠氮钠作为防腐剂(解决方式:酶免实验中的标本禁用叠氮钠作为防腐剂,可选用 proclin、硫柳汞等其他防腐剂)。

·阴阳性对照正常,但质控、参考品或个别弱阳性标本未能检出。
1. 未达要求的孵育温度及孵育时间可检出强阳性标本,但质控或弱阳性标本受 温度变化影响较大而被未检出(解决方式:质控品或标本避免反复冻融。标本在一周内使用的,可存于 2-8℃,如需长期保存,应置于-20℃以下保存。质控品应小量分装,并置于-20℃以下保存)。
2. 质控品或标本高温放置过久,或被反复冻融致待测物滴度下降,而未能检出(解决方式:重新设定酶标仪的参数,特别是检查滤光片是否匹配)。
3. 仪器设定不正确,滤光片不匹配(解决方式:重新设定酶标仪的参数,特别是检查滤光片是否匹配)。


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