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脂肪酶(LPS)ELISA试剂盒样品处理及要求

发布时间: 2021-12-22  点击次数: 134次
  脂肪酶(LPS)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)。猪中性脂肪酶预包被(LPS)捕获抗体包被的微孔,依次加入样品、标准和HRP标记的检测抗体,经过孵育和彻底洗涤后。与底物TMB同色,TMB在过氧化物酶的催化下变成蓝色,在酸的作用下变成最终的黄色。样品中的颜色深度与猪中性脂肪酶(LPS)呈正相关。用酶标仪在450nm波长处测量吸光度(OD值)以计算样品浓度。

 

脂肪酶(LPS)ELISA试剂盒
 

 

  【脂肪酶(LPS)ELISA试剂盒样品处理及要求】
  1、血清:将采集的全血样品置于血清分离管中室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×G离心20分钟取上清液,或将上清液保存于-20℃或-80℃,但切忌反复冻融。
  2、血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集样品,采集后30分钟内2-8℃保存1000小时×G离心15分钟,取上清液检测,或上清液保存于-20℃或-80℃,但避免反复冻融。
  3、组织匀浆:用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后切下组织。将切下的组织与相应体积的PBS混合(一般重量体积比为1:9。例如1g组织样品对应9mlPBS。具体体积可根据实验需要适当调整并记录。即建议在PBS中加入蛋白酶抑制剂)将其加入玻璃匀浆器并在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可将匀浆液超声破碎或反复冻融。最后将匀浆液在5000×G离心5~10分钟,取上清液进行检测。
  4、细胞培养上清液或其他生物样品:请1000×G离心20分钟,取上清液进行检测,或保存于-20℃或-80℃,但避免反复冻融。
  注意:样品溶血会影响最终检测结果,因此溶血样品不应检测。
  脂肪酶(LPS)ELISA试剂盒操作步骤:
  1、室温平衡20分钟后,从铝箔袋中取出需要的条带,剩余的条带用自封袋密封后放回4℃。
  2、设置标准孔和样品孔,每个标准孔加入50个不同浓度的标准品μL;
  3、在样品孔μL中加入50个待测样品;不加空白孔。
  4、标准孔和除空白孔外的样品孔各加入辣根过氧化物酶(HRP)标记检测抗体100μ50。用密封板膜密封反应孔,37℃水浴或培养箱中孵育60min。
  5、倒掉液体,在吸水纸上拍干,每个孔用洗液(350)μ50)填满,静置1分钟,倒掉洗液,在吸水纸上拍干,重复洗涤洗板5次(也可用洗板机洗板)。
  6、每个孔μ50中加入50个底物A和B。37℃避光孵育15分钟。
  7、每孔加入终止液50μ50。15min内在波长450nm处测量每孔的OD值。
 
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